产品介绍 

新赛美生物生产的蛋白裂解及上样缓冲液(ProtLytic Protein Lysis and Sample Loading，1X)，是一种经过改良的以溴酚蓝为染料 的可直接裂解蛋白且直接上样的缓冲液。可以直接用于细胞或组织样品的裂解，并用于后续常规的 SDS-PAGE 蛋白样品的上样。 直接裂解蛋白样品的优点是比较便捷；缺点是裂解好的蛋白样品不能用常规的 Bradford 法或 BCA 法测定蛋白浓度。这样蛋白 上样量的均一性就较难控制，需要借助考马斯亮蓝等的染色结果或 Western 的检测结果，来调整上样量。该产品是还原性的， 加入了 TCEP 的还原剂，替代了传统的 DTT 或 2-ME，还原剂 TCEP 无难闻气味，稳定性更高，还原效果更佳 。

操作步骤

1. 取适当量的蛋白裂解及上样缓冲液，在使用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1mM。 

注意：该产品不含蛋白酶等抑制剂，根据需要在使用前添加蛋白酶，磷酸酶等抑制剂（蛋白酶抑制剂混合液,货号：P001）。 

2.对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照 6 孔板每孔 加入 150-250 微升比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。 

3. 对于悬浮细胞：离心收集细胞，将细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻 弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。 对于组织样品： (a). 把组织剪切成细小的碎片。 (b) 按照每 20 毫克组织加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度 的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)  (c) 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。充分裂解后，将样品收集到一洁净离心管中。

4. 100℃或沸水浴加热 5-10 分钟，以充分变性蛋白。 

注意：煮沸前通常会发现蛋白样品内有粘稠的半透明状物体，通常在本上样缓冲液内沸水浴煮沸 8-10 分钟后可以确保该粘稠的 半透明状物体消失，以便于后续的上样操作。 

5.冷却到室温后，室温稍离心一下以沉淀可能出现的杂质等，上清即可直接上样到 SDS-PAGE 胶加样孔内即可。通常电泳至蓝色染料 到达胶的底端处附近即可停止电泳。 

注意事项

1. 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团胶状物，属正常现象。

2．为获得最佳的实验效果，可适当分装使用，以尽量避免反复冻融。

3．PMSF 应现用现加,需自备 PMSF。

4．裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。

5．蛋白酶抑制剂均有较高的毒性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。