HyperScript™ RT SuperMi×for qPCR

适用于两步法RT-qPCR的高效逆转录反应预混液。
春季促销,促销时间:2024年2月20日—6月30日
货号:APE-K1074
品牌:APExBIO
存储条件:-20℃
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产品描述

HyperScript™ RT SuperMix for qPCR是基于HyperScript™ Reverse Transcriptase(货号K1071)的逆转录反应预混液。HyperScript™ Reverse Transcriptase是在M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase基础上经过基因工程改造后获得的全新逆转录酶,相较而言HyperScript™ Reverse Transcriptase降低了RNase H活性且大幅度提高了热稳定性。HyperScript™ Reverse Transcriptase可耐受更高的反应温度,适用于具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。

HyperScript™ RT SuperMix for qPCR适用于两步法qRT-PCR检测,5X RT SuperMix中含有逆转录所需的所有成分,加入模板RNA和RNase Free ddH2O就可以迅速进行反应。RNA模板的体积最多可加到总体积的80%,非常适合于低浓度RNA模板的逆转录反应。5X RT SuperMix在-20℃不会冻结,使用方便。

本产品针对qPCR进行特别优化,经过比例优化的Oligo (dT)23VN primer mix/Random primers,使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始并具有相同的逆转录效率,最大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。逆转录产物适用于SYBR Green和探针法qPCR,可以根据实验目的,选择相应的试剂配合使用,进行高性能的基因表达分析。

 

产品特点

    · 5X RT SuperMix中含有逆转录所需的所有成分,方便操作;

    · 经过优化的Oligo (dT)23VN引物与随机引物比例可最大程度保证qPCR结果的真实性和可重复性;

    · 基于高效的Reverse Transcriptase,适用于具有二级结构的RNA 模板;

    · 可检测低至1 pg的模板起始量;

    · 提供的Oligo (dT)23VN引物比Oligo (dT)18对模板锚定能力更强,逆转录效率更高。

 

组分与储存条件

组分 50 rxns (20 μL reaction) 100 rxns (20 μL reaction)
RNase Free ddH2O 1 mL 1 mL x 2
5X RT SuperMix 200 μL 400 μL
5X No RT control Mix 20 μL 40 μL

所有组分储存于-20°C。

 

 

常见问题解答 (FAQs)

1)Q:收到产品后应怎么保存?

A:所有组分-20°C保存,有效期至少1年。

2)Q:能否通过延长逆转录时间来提高逆转录效率?

A:对于大多数基因,延长逆转录时间对逆转录效率并没有明显的提升;但对于一些GC含量较高或含高级复杂结构的模板,延长逆转录时间可提升逆转录效率。

3)Q:可以通过测逆转录产物cDNA的浓度来判定逆转录的效率吗?

A:不可以。因为逆转录产物除了cDNA外,还有buffer、逆转录酶、引物、未转录的模板RNA等,这些都会干扰cDNA浓度测定结果,因此不能反应真实的cDNA产量。

4)Q:逆转录产物用PCR扩增后跑胶检测无特异性条带?

A:可能原因及解决方案如下:

a. 模板RNA发生了降解:哺乳动物细胞或组织的总RNA琼脂糖电泳后应该可以看到清晰的18S和28S rRNA条带,并且28S rRNA和18S rRNA的亮度比例应该大于等于2.0,如果比例小于2.0,则说明总RNA发生了显著的降解,需重新制备模板。

b. 模板RNA的纯度偏低:在提取纯化RNA的过程中,残留在溶液中的一些成分如苯酚、SDS、EDTA等会抑制逆转录酶活性。可对RNA样品进行柱纯化,或者进行沉淀、洗涤和再溶解,通常可以有效去除残留的污染物。

c. 逆转录模板量不足:在抽提获得总RNA后,在进行一些精细的定量检测时通常会进行DNase I消化,以充分去除可能的残留的DNA的干扰。DNase I进行热失活时,需要加入EDTA至终浓度为2.5mM,否则RNA在没有螯合剂的情况下,在加热过程中容易被水解,从而导致模板量不足。此外,扩增特定基因时,需要先查询该基因的组织分布特点,利用其高表达的组织进行目的基因的反转录和克隆。

d. RNA模板富含GC或容易形成二级结构:可考虑把反转录温度提高到45-55°C。

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