特点

•     · 15分钟内纯化至多300 µg His-tagged蛋白
•     · 可在天然和变性条件下纯化
•     · 一步法即可纯化得到95%的产物
•     · 即用型离心柱，可用于快速自动化或手工纯化

产品详情

Ni-NTA硅胶基质通过大孔硅胶与Ni-NTA相结合来优化材料，从而抑制相互之间的非特异性疏水作用。Spin Kit中的Ni-NTA Columns为便捷的小离心柱形式，可便利地处理多份平行样本。适用于功能性筛选工程蛋白质、选择克隆表达性长片段转录产物，以及表达水平比较。每个离心管可以纯化至多300 µg的His-tagged蛋白。Ni-NTA离心管可以在天然或变性的条件下，一步法纯化蛋白质。Ni-NTA Spin Kit是离心纯化His-tagged蛋白的完整试剂盒。

使用Ni-NTA蛋白纯化产品纯化蛋白质。

可靠的自动化纯化。

图示蛋白在非变性条件下使用Ni-NTA Spin Columns从澄清的E. coli细胞裂解液中纯化获得，反应重复两次， 细胞裂解液来自5 ml LB培养基，纯化过程可以手动或在QIAcube全自动核酸纯化仪上自动化进行。CAT：氯霉素乙酰转移酶；GFP：绿色荧光蛋白；HIV-RT：人免疫缺陷病毒逆转录酶；IL-1b：白介素-1β。M：标记；C：澄清裂解液（每孔上样2 μl）；E：洗脱液（每孔上样3 μl）。

不同表达水平的纯化。

6xHis-tagged鼠DHFR在E. coli中的表达水平如图所示，使用Ni-NTA Spin Kit在变性条件下从3 ml 培养基中纯化，洗脱到pH 5.9的缓冲液中。SDS-PAGE后考马斯亮蓝染色看到条带。上样5 µl（每200 µl洗脱液）。1：细胞裂解液；2：流出液；3：第一次洗脱；4：第二次洗脱。

性能

Ni-NTA Spin Kit是快速、高效纯化蛋白质的理想试剂，同时也呈现了高度的可重复性。

原理

QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System，包括Ni-NTA Spin Columns，原理是基于著名专利技术Ni-NTA（镍-次氮基三乙酸）树脂，用于纯化带有6个或者以上组氨酸残基His标签的蛋白质。该技术能够在天然或者变性的条件下，从任何表达体系中，一步法纯化大多数His-tagged蛋白。NTA有4个镍离子的螯合位，相比金属-螯合纯化系统只有3个与金属离子相互作用的位点，能够更紧密地与镍结合。额外的螯合位点防止镍离子脱落，从而拥有更强的结合能力，并且相比于其他金属-螯合纯化系统，该系统能制备更高纯度的蛋白质。QIAexpress体系可以从任何的表达体系中，包括杆状病毒、哺乳动物细胞、酵母和细菌，纯化His-tagged蛋白。

操作流程

纯化His-tagged蛋白包括4个步骤：细胞裂解、蛋白结合、洗涤和洗脱。利用QIAexpress系统纯化重组蛋白并不取决于蛋白质或者His标签的三维空间结构。这一特性能够在天然或变性条件下，一步从稀释溶液或者粗裂解物中纯化蛋白。多至600 μl细胞裂解物可加注到Ni-NTA离心柱上。标签蛋白在2分钟快速离心结合到Ni-NTA硅胶基质上，无标签蛋白则流过基质。在洗涤步骤后，纯化的蛋白质在温和条件下洗脱（如pH降至5.9，或者加入100–500 mM咪唑）至100–300 μl体积。因为His标签较小，几乎不产生免疫原，通常无需去除。纯化的蛋白可以立即使用。蛋白质可以从多个小规模的表达培养物中纯化得到，只需约30分钟或者60分钟（自动化的QIAcube全自动核酸纯化仪操作流程）。强变性剂和清洁剂可以有效地溶解和纯化受体、膜蛋白和形成包涵体蛋白质。这些试剂能够高效地去除非特异性结合的污染物，可以包含在洗涤缓冲液中。在温和的条件下，加入100–250 mM咪唑作为竞争物或者降低pH值洗脱纯化的蛋白质。

所列的试剂已成功地运用在所给的浓度上限中。.

应用

QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System提供可靠的一步法纯化蛋白质，适用于各种应用，包括：

    · 结构和功能研究

    · 蛋白结晶，用于三维结构分析

    ·蛋白与蛋白，蛋白与DNA相互作用研究

    · 抗体制备

参数