产品简介
磷酸果糖激酶(Phosphofructokinase,PFK,EC 2.7.1.11)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,负责将果糖-6-磷酸和 ATP 转化为果糖二磷酸和 ADP,是糖酵解过程的关键调节酶之一。
PFK 催化果糖-6-磷酸和 ATP 生成果糖-二磷酸和 ADP,丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化 NADH 氧化生成 NAD+,在 340nm 下测定 NADH 下降速率,即可反映 PFK 活性。
溶液的配制
1、 试剂二 A:临用前加入 1mL 蒸馏水,用不完的试剂-20℃分装保存 4 周,避免反复冻融;
2、 试剂二 B:临用前加入 1mL 蒸馏水,用不完的试剂-20℃分装保存 4 周,避免反复冻融;
3、 试剂二 C:临用前取一支加入 0.25mL 蒸馏水,用不完的试剂-20℃分装保存 2 周,避免反复冻融;
4、 试剂二 D:临用前加入 1mL 蒸馏水,用不完的试剂-20℃分装保存 4 周,避免反复冻融;
5、 试剂三:临用前根据用量按照试剂三:蒸馏水为 2μL:13μL(约 3T)的体积比例充分混匀,现用现配;
6、 试剂四:临用前根据用量按照试剂四:蒸馏水为 4μL:65μL(约 13T)的体积比例充分混匀,现用现配;
7、 工作液的配制:根据样本量按试剂一:试剂二 A:试剂二 B:试剂二 C:试剂二 D =22mL:0.5mL:0.5mL:0.25mL:0.5mL(约 29T)的比例配制工作液,现用现配;。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品
紫外分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
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