2-D 定量试剂盒专门用于准确定量电泳技术中,所使用的样品蛋白浓度而设计,比如用于双向电泳、SDS-PAGE 或者 IEF 等电聚焦电泳样品。
普通的分光光度法定量蛋白质依赖于考马斯染料结合或者蛋白催化二价铜 (Cu2+) 离子还原为一价亚铜 (Cu+) 离子。染料结合测定法不能用来测定存在其它可与染料结合的试剂样品。这些物质包括两性电解质载体和去污剂,比如 PlusOne CHAPS、SDS 和 Triton X-100。依赖于二甲铜离子还原的测定法不能用来测定存在还原剂,比如 DTT,也不能用来测定存在可与二价铜离子形成复合物的试剂,比如硫脲或乙二胺四乙酸 (EDTA)。
2-D 定量试剂盒的工作过程是通过定量沉淀蛋白质,将干扰物弃去。此测定法的原理是基于铜离子与蛋白质的特异结合。用含铜溶液将沉淀的蛋白质重悬,用比色剂测定未结合的铜。样品在 480 nm 波长的吸光度值与蛋白质浓度成反比。本测定法对蛋白质的线性反应范围是 0 - 50 μg,推荐的样品量为 1 - 50 μl。
经测试与 2-D 定量试剂盒兼容的试剂
被测试的化合物:浓度 SDS:2% (w/v) CHAPS:4% (w/v) Triton X-100:1% (w/v) Pharmalyte, pH 3-10:2% (v/v) IPG 缓冲液,pH 3-10 NL:2% (v/v) Tris:50 mM 乙二胺四乙酸 (EDTA):10 mM DTT:1% (65 mM) 2-巯基乙醇:2% (v/v) 尿素:8 M 硫脲:2 M 甘油(丙三醇):30% (w/v)
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