特点

    · 用于室温设置的独特两相热启动程序

    · 可视化移液控制，减少移液错误

    · 成功RT-PCR过程中阳性验证的内部控制

    · 对多个模板日志进行精确量化

    · 在一个试管中灵敏检测多达5个目标

产品详情

QuantiNova RT-PCR Kits (real-time RT-PCR kits) 能够通过使用SYBR Green I或序列特异性探针的实时一步PCR对RNA靶进行敏感定量。多种集成安全功能的组合消除了变量并防止了伪影，确保了可靠的基因表达谱分析。即用主混合物中独特的两相热启动和PCR缓冲系统的组合允许室温设置，并确保任何实时循环仪上的高灵敏度qRT PCR。可选的QuantiNova内控RNA可用于测试成功的逆转录和扩增。它旨在报告仪器或化学故障、分析设置错误和抑制剂的存在。此外，可视移液控制可用于监控正确的移液。QuantiNova Probe RT-PCR程序中整合的gDNA还原步骤可防止基因组DNA携带导致的转录物过度定量。

QuantiNova Multiplex RT-PCR Kit 能够通过多重实时RT-PCR在单个试管中快速可靠地定量多达5个RNA靶标。我们的Q-Bond技术和优化的主混合物可在1小时内促进超快多重实时RT-PCR。独特的两相热启动程序与我们的多重PCR缓冲系统相结合，确保在任何实时循环器上进行高灵敏度的qRT PCR，无需优化，并实现室温下的自动反应设置。该试剂盒还提供了从培养细胞中提取RNA和直接扩增的方案，甚至可以扩增到单个细胞。可选的QuantiNova内部对照RNA可用于监测成功的逆转录和扩增，而视觉移液控制可用于监测正确的移液。

性能

内置颜色指示剂，用于精确的反应设置

QuantiNova RT-PCR Kits 提供的主混合物含有一种惰性蓝色染料，它不会干扰实时PCR，但会增加试管或井中的能见度。QuantiNova黄色模板稀释缓冲液含有惰性黄色染料。当模板核酸在QuantiNova黄色模板稀释缓冲液中稀释并添加到主混合物中时，溶液的颜色从蓝色变为绿色（见图“内置移液控制指示的准确反应设置”），提供了每个反应设置正确的视觉指示。

QuantiNova SYBR Green 和 QuantiNova Probe RT-PCR Kits

QuantiNova SYBR Green和QuantiNova Probe RT-PCR Kits 使用两相热启动程序。这包括在50°C（SYBR绿色和多重试剂盒）或45°C（探针试剂盒）下热启动脚本逆转录酶和在95°C下PCR聚合酶的热介导激活。在低温下，热启动脚本与RT阻滞剂分子形成复合物，导致失活。在50°C（SYBR Green和multiplex试剂盒）或45°C（探针试剂盒）下，复合物解离并释放活性热启动脚本酶。QuantiNova DNA聚合酶通过QuantiNova抗体和稳定复合物的新型添加剂QuantinovaGuard保持在非活性状态。这提高了热启动程序的严格性，并防止非特异性退火引物和引物二聚体的延伸。在将温度升高至95°C的2分钟（SYBR Green和multiplex试剂盒）或5分钟（探针试剂盒）内，QuantiNova抗体和QuantinovaGuard变性，QuantiNova DNA聚合酶激活，从而实现PCR扩增。这种独特的两相热启动使反应设置能够在室温下保持稳定至少2小时，防止产生伪影，也有助于自动反应设置。

QuantiNova DNA聚合酶和RT-PCR缓冲液的独特组成提供了低拷贝RNA靶标的灵敏定量，以及在任何普通循环仪上的宽线性范围内的精确定量。

QuantiNova探针RT-PCR程序中的gDNA还原步骤最大限度地减少了基因组DNA携带引起的错误定量。基因组DNA的减少对于精确的基因表达结果至关重要，并且不需要设计RNA特异性引物或探针。由于不需要在RNA样品纯化期间或之后进行单独的DNA酶消化，因此通过整合的gDNA还原，节省了时间并降低了成本。

新开发的内部控制是一种定义的转录物（RNA分子），可以简单地添加到样本中并转录成cDNA。用于报告仪器或化学故障、分析设置错误或抑制剂的存在。由于内部控制行为与真实转录物类似（见图“RT-PCR抑制的可靠监测”），因此可用于确认成功的逆转录和扩增。双重功能还能够包含内部对照或参考基因，用于与靶基因直接比较。

QuantiNova Multiplex RT-PCR Kits

QuantiNova多重RT-PCR试剂盒提供的专用主混合物允许轻松设置多重反应，并确保结果与单重RT-PCR相当。高度浓缩的4x主混合物可容纳高达800 ng的模板输入，即使在高达5倍的反应中也能提供出色的灵敏度。

该试剂盒可以清楚地区分模板量的微小差异，并提供丰度差异很大的目标的准确定量。此外，还提供了从培养细胞直接扩增的简单方案，甚至可以从单个细胞进行RNA分析。独特的两相热启动程序（确保了卓越的特异性，并允许室温反应设置，这非常适合于自动化程序。特别开发的PCR缓冲液含有添加的Q键，可显著减少退火和延长时间，允许在约一小时内进行多重qRT PCR。视觉移液控制的添加通过最大限度地减少人为错误提高了过程中的安全性。可与靶共同检测的可选内部对照RNA消除了由抑制剂或其他因素引起的变化，从而可以监测准确性和再现性。总体而言，我们的超快和过程中控制的多重qRT PCR工作流程通过从有限的样本材料中产生更多洞察来提高效率。

原理

QuantiNova RT-PCR Kits 包含优化的即用主混合物，用于使用荧光染料SYBR Green I或序列特异性探针对RNA靶标进行高度特异和灵敏的实时定量。QuantiNova Probe RT-PCR Kit设计用于不同类型的序列特异性探针，包括水解探针（例如TaqMan和其他双标记探针）和蝎子引物。该试剂盒具有独特的PCR缓冲液，含有K+和NH4+离子的平衡组合，可促进特异性引物退火，实现高特异性和敏感性。此外，热启动脚本允许从大量RNA模板量合成cDNA，而QuantiNova DNA聚合酶提供严格的热启动程序，防止非特异性产物的形成。独特的两相热启动程序允许反应设置在室温下保持稳定达两小时，支持自动反应设置。

内置的视觉控件允许您检查模板是否已添加到反应中，从而防止在反应设置过程中出现移液错误。

通过检测cDNA合成的变异，您可以检查结果的再现性。新开发的内部控制是一种定义的转录物（RNA分子），可以选择性地添加到样本中并转录成cDNA。它旨在报告仪器或化学故障、分析设置错误和抑制剂的存在。

为了在实时RT-PCR基因表达分析中获得准确的结果，只扩增和检测cDNA是很重要的。使用QuantiNova Probe RT-PCR程序中的gDNA还原步骤可防止基因组DNA的干扰。由于在RNA样品纯化期间或之后不需要单独的DNA酶消化，因此节省了时间并降低了成本。此外，设计RNA特异性引物或探针也不是必需的。

QuantiNova Multiplex RT-PCR Kit 在标准和快速循环仪上均能在宽动态范围内提供高度灵敏和快速的结果，无需优化。特别开发的PCR缓冲液含有附加Q键，可显著减少退火和延长时间。在同一反应中扩增参考基因和目标基因通过最小化井间差异和处理误差来提高可靠性。此外，提供了内部对照RNA，并可同时检测以监测成功的逆转录和qPCR。

操作流程

QuantiNova SYBR Green和Probe RT-PCR Kits 克服了优化反应条件的需要，这可能是繁琐和耗时的。只需将引物、RNA模板和RT混合物添加到即用RT-PCR或主混合物中，然后开始反应。遵循QuantiNova SYBR Green RT-PCR Kit 说明书中的方案，在任何实时循环仪上获得快速可靠的结果。

QuantiNova Multiplex RT-PCR Kit 包含即用4x master mix，无需优化反应和循环条件。只需将RT混合物、高达800 ng的模板RNA和引物探针组添加到主混合物中，并按照说明书中的方案在任何实时循环仪上获得快速可靠的结果。ROX参考染料也在单独的管中提供，因此可以针对您的特定仪器调整浓度。该试剂盒还提供了从培养细胞直接扩增的简单快速的方案。建议的输入量范围从2000个细胞到单个细胞，例如通过连续稀释或使用QIAscout仪器分离。QuantiNova内部对照RNA（QN-IC RNA）是一种内部扩增对照，可任选用于测试成功的逆转录和扩增。当使用QuantiNova IC探针分析时，在转子基因Q上的黄色通道中或在其他实时PCR仪器上的VIC/HEX染料通道中检测到它作为200 bp的内部对照。或者，当使用QuantiNova IC探针检测Red 650时，它可以在转子基因Q上的红色通道中或在其他实时PCR仪器上的Cy5染料通道中检测。

应用

QuantiNova SYBR Green and Probe RT-PCR Kits可用于任何实时循环仪上RNA靶的基因表达分析。这包括转子基因Q和来自应用生物系统、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche和安捷伦的仪器。

QuantiNova Multiplex RT-PCR Kit 可用于任何实时循环仪上RNA靶的多重基因表达分析。为了充分受益于多路复用，我们建议使用提供高达5倍容量的仪器，如Rotor Gene Q。