产品简介

本试剂盒是一种高效、稳定、快速并可以去除基因组 DNA 污染的反转录系统。 本试剂盒含有高效去除基因组 DNA 的 gDNase， 有效避免 Total RNA 中基因组 DNA 的干扰； 高效反转录酶 FastKing RT Enzyme 是通过分子改造后的新型反转录酶，特别增加了疏水 motif，具有更强的 RNA 亲和性和热稳定性，从而进一步提高了其反转录效率和反应速率，并使其在通读 GC 含量高、二级结构复杂的 RNA 模板和抗逆性等方面的表现也更为的突出。

产品特点

■ 高效：修饰了疏水 motif，反转效率超过 95%

■ 灵敏：低至 1 ng 的模板也能被准确识别

■ 抗逆：无惧复杂模板，抵御杂质干扰

■ 快速：21 min 高效制备无基因组残留的 cDNA

下游应用

反转录后的 cDNA 可用于常规 PCR，荧光定量 PCR，cDNA 文库构建，SAGE（基因表达连续分析），引物延伸等多种常规实验。

21 min 的“一管式”革命

仅需 21 min 在同一管内完成基因组去除和高效反转录过程，无需更换反应管和独立的DNase I 处理过程，相对于传统方法12 步操作所需的140 min，大大简化了操作步骤，节省了大量操作时间。

超强的复杂模板通读能力

——可轻松通读高GC 和复杂模板

单链RNA 因链间氢键作用而存在广泛的复杂二级结构区域，普通反转录酶在遇到复杂二级结构时可能会导致反转录的终止，从而无法成功完成cDNA 的合成。而新一代King 反转录酶具有独特的结构域，可以破坏RNA 链间的氢键作用力，从而打开RNA的复杂二级结构，保证反转录的正常进行。

实验结果

3min 高效去除基因组DNA

gDNase 可高效快速的去除gDNA，并直接进行反转录实验，无需繁琐的后续RNA 纯化步骤。

1 组：不去基因组反转录；2 组：不去基因组不反转录；

3 组：去基因组后反转录；4 组：去基因组不反转录。
方法：以1 μg Hela 细胞RNA（有基因组残留）为模板，对TNFalpha基因（引物设计在外显子上，可以cDNA 或基因组为模板进行扩增）进行荧光定量PCR 检测。
结果：如图所示，2 组可反映RNA 中基因组的残留情况，3 组可准确反映TNF-alpha 的真实表达水平，1 组因基因组残留而导致最终定量结果发生错误，4 组表明KR116 可以完全去除RNA 中残留的基因组DNA。

继承King 家族卓越品质

超高的反转录效率
——反转录效率高达95%

一般的反转录酶其反转录效率在40-60%，为增加cDNA 产量，其通过推荐更高的RNA 上样量来实现，King 反转录酶由于其特有的对于RNA 模板的高亲和力，使其反转录效率能够达到95% 以上，所以无需大量上样即可满足后续实验，既节省RNA，又使得cDNA 高纯高产。

实验结果显示：不同来源反转录酶的性能比较:同比无RNaseH活性M-MLV及 AMV系列反转录酶，King Reverse Transcriptase反转录效率有明显优势。

超强的复杂模板通读能力
——可轻松通读高GC 和复杂模板

单链RNA 因链间氢键作用而存在广泛的复杂二级结构区域，普通反转录酶在遇到复杂二级结构时可能会导致反转录的终止，从而无法成功完成cDNA 的合成。而新一代King 反转录酶具有独特的结构域，可以破坏RNA 链间的氢键作用力，从而打开RNA 的复杂二级结构，保证反转录的正常进行。

图1. 使用TIANGEN FastKing RT kit（KR116，左）及国外A 公司同类产品（右）反转录小鼠RNA，

使用TIANGEN FP205 进行定量MM5 基因，展示扩增曲线和熔解曲线。RNA 使用量分别为1000 ng，100 ng，10 ng，1 ng。结果显示，TIANGEN KR116 反转录梯度清晰，Ct 值靠前，并且对于低丰度模板（1ng，蓝色箭头）的反转录具有明显优势。

图2. 使用TIANGEN FastKing RT kit（KR116）及A 公司同类产品分别反转录大鼠的正常RNA 样本（红色），酚类残留量大的RNA 样本（绿色），和醇类残留量大的RNA 样本（蓝色），使用TIANGEN FP205 进行定量RNC 基因，展示扩增曲线和平均Ct 值。结果显示，TIANGEN KR116 反转录后定量Ct 值靠前，并且抗逆性优秀，对于高杂质残留的模板具有明显优势。