特点
· 有效的小RNA(miRNA)和总RNA纯化,即使来自小样本
· 有效富集小于200个核苷酸的miRNA和RNA
· 分离馏分的共纯化或分离方案
· 适用于所有下游应用的高纯度RNA
· 96孔板自动化实验方案
产品详情
miRNeasy Kits 能够从所有类型的动物组织和细胞中纯化总RNA,包括难以溶解的组织和小组织和细胞样品。或者,可以单独纯化富含miRNA的级分和总RNA(>200 nt)级分(对于单独纯化,当使用miRNeasy Micro或Mini Kit 时,需要RNeasy MinElute Cleanup Kit,当使用MiRNasy 96 Kit时需要额外的RNeasy 96板)。可在QIAcube Connect上自动纯化1-12个样品。可以使用离心或真空程序以方便的96孔形式进行高通量处理。
新的miRNeasy Tissue/Cells Advanced Mini Kit–使用我们的无QIAzol free Advanced chemistry,在没有苯酚/氯仿的情况下更快获得优异的结果。
性能
基于QIAzol的小RNA纯化(miRNA纯化)使用miRNASY Kits 有效地纯化小组织(最多5 mg组织)和细胞(最多1 x 106个细胞)样本中的RNA。RNA可以从各种组织和细胞中纯化,包括难以溶解的组织。
包括miRNA的总RNA的纯化允许将miRNA表达水平与管家参考基因或任何其他感兴趣的mRNA的表达水平进行直接比较。或者,对于一些敏感的下游应用,可能需要不含较大RNA的富含miRNA的部分。miRNeasy试剂盒能够有效富集大小约为18nT的RNA。与使用替代试剂盒制备的样品相比,使用miRNASY Kits 纯化后,非常小的RNA的存在清晰可见。miRNeasy Kits 有效地从组织和细胞中纯化RNA,即使使用少量的起始材料。
RNA可以用miRNeasy Kits 从各种组织和细胞中纯化,包括难以溶解的组织。miRNeasy程序消除了可能干扰后续分析的盐或酚污染的可能性。除了更高的纯度外,miRNASY Kits 比其他miRNA纯化方法(如使用TRIzol试剂)提供了更高的产率。
使用miRNeasy Kits 制备的RNA纯度高,可用于敏感的下游应用。
原理
miRNeasy Kits 将基于苯酚/胍的样品裂解与基于二氧化硅膜的总RNA纯化相结合。试剂盒中包含的QIAzol裂解试剂是苯酚和硫氰酸胍的单相溶液,旨在促进组织裂解,抑制RNA酶,并通过有机萃取从裂解液中去除大部分细胞DNA和蛋白质。
miRNeasy Micro和Mini Kit 可在QIAcube Connect上实现自动化。miRNeasy 96 Kit 支持真空和/或离心处理。
操作流程
miRNASY Kits 够纯化总RNA,其中包括约18个核苷酸(nt)以上的RNA。或者,可以单独纯化富含miRNA的部分和总RNA(>200 nt)部分(参见流程图)。包括miRNA在内的总RNA非常适合于通过实时RT-PCR进行miRNA定量。在mRNA和rRNA可能导致背景增加的某些应用中,在单独的部分中富集小RNA可能是有利的。该专门协议要求使用RNeasy MinElute Cleanup Kit 和miRNeasy Micro or Mini Kit。如果使用miRNeasy 96 Kit,每96个样品需要2个RNeasy 96板。
QIAcube Connect上的自动miRNA纯化
相分离后水相中总RNA(包括miRNA)的纯化可以在QIAcube Connect上使用miRNeasy Micro or Mini Kit完全自动化。创新的QIAcube Connect使用先进技术处理QIAGEN离心柱,使自动化、低吞吐量样品制备无缝集成到您的实验室工作流程中。使用QIAcube Connect的样品制备遵循与手动程序相同的步骤(即,溶解、结合、洗涤和洗脱),使您能够继续使用miRNeasy Micro or Mini Kit纯化高质量RNA。
应用
miRNASY Kits 允许用总RNA纯化miRNA,用于多种应用,包括:
· 转录组测序
· 定量实时RT-PCR(例如,使用miScript PCR系统)
· Northern印迹分析
· 微阵列分析
miRNeasy Kits的比较
Features | miRNeasy Micro Kit | miRNeasy Mini Kit | miRNeasy 96 Kit |
---|---|---|---|
Applications | PCR, qPCR, real-time RT-PCR,microarray | PCR, qPCR, real-time RT-PCR,microarray | PCR, qPCR, real-time RT-PCR,microarray |
Elution volume | 10 µl | 30 µl | Min. 2 x 45 µl |
Format | MinElute Spin column | Spin column | 96-well plate |
Main sample type | Tissue, cells | Tissue, cells | Tissue, cells |
Processing | Manual (centrifugation or vacuum) | Manual (centrifugation or vacuum) | Manual (centrifugation or vacuum) |
Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein | miRNA, total RNA | miRNA, total RNA | miRNA, total RNA |
Sample amount | 5 mg (10 mg for adipose) tissue, 1 x 106 cells | 50 mg (100 mg for adipose) tissue, 1 x 107 cells | 50 mg (100 mg for adipose) tissue, 1 x 107 cells |
Technology | Silica technology | Silica technology | Silica technology |
Time per run or per prep | – | – | <2 hours |
Yield | Varies | Varies | Varies |
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