特点

    · 无酚方案——无需相分离或在罩下工作

    · 由于采用了先进的化学和gDNA消除器柱，因此操作简便快捷

    · 有效富集小于200个核苷酸的miRNA和RNA

    · 所有下游应用的一致、纯RNA

产品详情

miRNeasy Tissue/Cells Advanced Kits 是成熟的miRNeasy Kits 的第二代。这些改进版本结合了无酚高级化学和gDNA消除器柱，用于安全方便的RNA分离。它们能够纯化总RNA，包括小RNA≥18个核苷酸，来自动物组织和细胞，包括小样本。该试剂盒使用旋转柱进行低通量RNA纯化，并可在QIAcube Connect上自动进行高通量纯化。

性能

miRNeasy Tissue/Cells Advanced Kits 是经典miRNeasy试剂盒的无酚替代品，不会影响RNA产量和质量。能够有效富集大小约为18个核苷酸的RNA。

miRNeasy Tissue/Cells Advanced Micro Kit 可有效地从高达5 mg的冷冻组织或1 x 106细胞中纯化RNA，但也可使用显著较低量的起始材料。miRNeasy Tissue/Cells Advanced Mini Kit 可有效纯化30 mg冷冻组织或1 x 107细胞中的RNA。

miRNeasy Tissue/Cells Advanced Kits 包括gDNA消除器程序，允许高、可重复的RNA产量和高效的基因组DNA消除，用于敏感应用。安捷伦RIN值接近10的总RNA通常从组织和培养细胞中获得。与其他供应商的试剂盒不同，miRNeasy Tissue/Cells Advanced Mini Kit 结合了易用性和无酚方案，在RNA质量或产量方面没有任何妥协。

原理

miRNeasy Tissue/Cells Advanced Kits 将基于胍的样品裂解与抑制剂去除步骤以及基于二氧化硅膜的总RNA纯化相结合，其中包括miRNA和其他小RNA。试剂盒中包含的缓冲液RLT含有硫氰酸胍，有助于RNA酶和其他蛋白质的裂解和变性。因此，在缓冲液RLT中溶解的样品中的RNA是稳定的，并防止降解。

操作流程

通过将缓冲液RLT添加到组织或细胞样品中，然后进行彻底的破坏和均质化步骤，以确保RNA酶的完全溶解和失活，从而实现样品裂解。接下来，将缓冲液AL添加到裂解液中，以通过gDNA消除器旋转柱优化gDNA去除。根据起始材料的类型和数量，可以进行可选的柱上DNase消化（不包括在试剂盒中）。通过离心将缓冲液RPP添加到流通中以沉淀抑制剂（主要是在组织和细胞样品中高度浓缩并可能干扰RNA分离或下游分析的蛋白质）。将含有总RNA的上清液转移到新的反应管中，并加入异丙醇，为所有RNA分子提供合适的结合条件≥18个核苷酸。然后将样品应用于RNeasy Mini 离心柱（miRNeasy Tissue/Cells Advanced Mini）或RNeasy UCP MinElute旋转柱（miRNeasy Tissue/Cells Advanced Micro），其中总RNA结合到膜上，所有污染物被有效地洗去。高质量RNA，包括miRNA和其他小RNA，在少量无RNA酶的水中洗脱。

应用

miRNeasy Tissue/Cells Advanced Kits 允许纯化miRNA和总RNA，用于多种应用，包括：

    · RNA序列

    · 定量、实时RT-PCR

    · 微阵列分析

    · Northern印迹分析

参数