特点

•     · 灵敏并特异性定量检测miRNA

•     · 利用单一cDNA定量检测多种miRNA

•     · 利用同一cDNA定量检测miRNA和mRNA

•     · 包含ROX染料，可用于标准化荧光结果

产品详情

miScript SYBR Green PCR Kit是miScript PCR System不可缺少的部分，用于定量检测miRNA。该试剂盒基于经验证的QuantiTect SYBR Green Kits技术。miScript II RT Kit得到的cDNA作为模板，配合miScript SYBR Green PCR Kit和PCR芯片（miRNome或Pathway-Focused miScript miRNA PCR Arrays）或适当的检测（用于miRNA或其它非编码RNA的miScript Primer Assays、用于miRNA前体的miScript Precursor Assays或用于mRNA的QuantiTect Primer Assays）进行real-time PCR。

性能

miScript SYBR Green PCR Kit配合miScript PCR System的组件，灵敏和特异性的检测和定量miRNA。miScript PCR System灵敏度高、动态范围广。持续高的扩增效率，确保使用∆∆C_T方法进行多个miRNAs表达分析结果的准确性（参见下图）。其卓越的性能使得初次尝试时即可获得高度重复性结果。

miRNA expression in colorectal cancer.

从人结肠腺癌总RNA和正常邻近结肠总RNA制备cDNA。使用人miRNome miScript miRNA PCR阵列进行miRNomes分析。腺癌组织中有56个miRNA强下调，50个强上调（红线表示±4倍变化）。

原理

miScript PCR System配合SYBR Green-based real-time PCR，灵敏和特异性的定量和分析miRNA。miScript PCR System可以完成从RNA中合成cDNA和后续的real-time PCR检测miRNAs涉及的所有步骤。

miScript PCR System包含以下组分：

        ·  miScript II RT Kit，可简单、单步合成cDNA。单个cDNA合成反应可用于检测数以百计的miRNAs。双缓冲体系满足使用real-time PCR进行miRNA定量的独特要求。

        · miScript SYBR Green PCR Kit，包含QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix和反向引物miScript Universal Primer，配合miScript Primer Assay或miScript miRNA PCR Array进行miRNAs检测。

        · miScript Primer Assay或miScript Precursor Assay，包含QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix和反向引物miScript Universal Primer，配合miScript Primer Assay或miScript miRNA PCR Array进行miRNAs检测。

        · miScript miRNA PCR Array，miRNome或Pathway-Focused miScript miRNA PCR Arrays被预先设定，单次使用的PCR芯片可快速分析成熟miRNAs。

miScript miRNA PCR Array数据分析仪，免费的基于网络的工具，简化了用于miScript miRNA PCR Arrays相对定量的ΔΔC_T方法。

 

Real-time PCR检测miRNA

miScript SYBR Green PCR Kit包含QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix和miScript Universal Primer，该引物对在逆转录反应中加入到cDNA的5'端的通用标签序列有特异性。单次cDNA合成反应足够用于许多miRNAs。使用miScript HiSpec Buffer制备的cDNA，配合miScript miRNA PCR Arrays或miScript Primer Assays可用于定量成熟miRNA。使用miScript HiFlex Buffer制备的cDNA配合real-time PCR步骤中合适的引物：用于miRNA或其它非编码RNA的miScript Primer Assays、用于miRNA前体的miScript Precursor Assays或用于mRNA的QuantiTect Primer Assays，可用于检测不同种类的RNA。

操作流程

使用the miScript II RT Kit进行逆转录反应，得到的cDNA作为模板，配合miScript SYBR Green PCR Kit和合适的miScript Primer Assays和miScript miRNA PCR Arrays进行real-time PCR。使得miRNA定量和分析简单可行，实验室的real-time PCR循环仪上均可进行。

应用

miScript SYBR Green PCR Kit作为miScript PCR System的一部分，用于：

•     · 成熟miRNA的定量检测和谱分析

•     · 同时检测miRNA和mRNA

•     · 同时检测miRNA和miRNA前体

•     · 检测snoRNA和其他非编码RNA