特点

•     · 灵敏并特异性的定量检测miRNA
•     · 对miRBase数据库中未列出的成熟miRNAs，提供用户订制服务
•     · 可在GeneGlobe便利的订购

产品详情

miScript Primer Assays是miRNA特异性引物，适合最新版本miRBase数据库中的所有人类、小鼠、大鼠和狗的miRNAs。miScript Primer Assays作为miScript PCR System的一部分，用于定量检测miRNA。cDNA使用miScript II RT Kit配合miScript HiSpec Buffer（只适用于成熟miRNA检测）或miScript HiFlex Buffer（使用相应的检测试剂同时定量检测各物种RNA）制备。cDNA作为模板，配合miScript Primer Assay和miScript SYBR Green PCR Kit进行real-time PCR。

准确检测低至10拷贝的miRNA。

使用miScript II RT Kit及 [A] miScript HiSpec Buffer或 [B] miScript HiFlex Buffer（试剂盒中均有提供）以及合成miR-21生成cDNA。使用miScript PCR System及不同量（10个拷贝至106个拷贝）的cDNA进行real-time PCR。在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上进行real-time PCR。随着miRNA拷贝数增加，获得的CT值呈线性下降，证明了不同的模板量的灵敏检测。

线性范围广，扩增效率高。

使用miRNeasy Mini Kit从HeLa S3细胞中纯化总RNA。使用miScript II RT Kit及 [A] miScript HiSpec Buffer或 [B] miScript HiFlex Buffer（试剂盒中均有提供），从不同量的RNA（10 pg至2 µg）中制备cDNA。使用针对miR-16、miR-20a或miR-21的miScript Primer Assay，以各cDNA作为模板进行real-time PCR反应。线性标准曲线显示了miScript PCR System较宽的动态范围和高扩增效率。

性能

miScript Primer Assays配合miScript PCR System检测成熟miRNA，结果可靠、重复性好。由于许多miRNAs表达水平低，灵敏度对数据的可靠性具有关键作用。miScript PCR System灵敏度高，可检测低至10拷贝的miRNA。只需10 pg的总RNA，即可得到准确、重复性好的miRNA数据。持续高的扩增效率，确保使用∆∆C_T方法进行多个miRNAs表达分析结果的准确性。

原理

miScript PCR System配合SYBR^® Green-based real-time PCR，灵敏和特异性定量检测和分析miRNA。miScript PCR System可以完成从RNA中合成cDNA和后续的real-time PCR检测miRNAs涉及的所有步骤。

使用miScript PCR System定量检测成熟miRNA，需要用到：

•     · miScript II RT Kit，可简单、单步合成cDNA。单个cDNA合成反应可用于检测数以百计的miRNAs。双缓冲体系满足使用real-time PCR进行miRNA定量的独特要求。
•     · miScript SYBR^® Green PCR Kit，包含QuantiTect SYBR^® Green PCR Master Mix和反向引物miScript Universal Primer，配合miScript Primer Assay或miScript miRNA PCR Array进行miRNAs检测。如需检测miRNA前体，无需使用miScript Universal Primer。
•     · miScript Primer Assay，是miRNA特异性正向引物，配合miRBase数据库中的最新信息进行成熟miRNAs检测。 

操作流程

成熟miRNA检测实验中，使用miScript II RT Kit中的miScript HiSpec Buffer或miScript HiFlex Buffer，通过逆转录反应制备cDNA，作为real-time PCR模板。使用miRNA特异性的miScript Primer Assay（正向引物）和包含miScript Universal Primer（反向引物）和QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix的miScript SYBR Green PCR Kit，进行real-time PCR反应。

其它非编码RNA检测实验中，使用miScript II RT Kit中的miScript HiFlex Buffer，通过逆转录反应制备cDNA，作为real-time PCR模板。使用miScript Primer Assay（正向引物）和包含miScript Universal Primer（反向引物）和QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix的miScript SYBR Green PCR Kit，进行real-time PCR反应。如果没有针对目的小RNA的miScript Primer Assay，可以订制设计。

应用

miScript Primer Assays作为miScript PCR System的一部分，用于：

•     · 定量检测成熟miRNA
•     · snoRNA检测