特点
· 灵敏并特异性定量检测miRNA
· 利用单一cDNA定量检测多种miRNA
· 利用同一cDNA定量检测miRNA和mRNA
· 包含ROX染料,可用于标准化荧光结果
产品详情
miScript SYBR Green PCR Kit是miScript PCR System不可缺少的部分,用于定量检测miRNA。该试剂盒基于经验证的QuantiTect SYBR Green Kits技术。miScript II RT Kit得到的cDNA作为模板,配合miScript SYBR Green PCR Kit和PCR芯片(miRNome或Pathway-Focused miScript miRNA PCR Arrays)或适当的检测(用于miRNA或其它非编码RNA的miScript Primer Assays、用于miRNA前体的miScript Precursor Assays或用于mRNA的QuantiTect Primer Assays)进行real-time PCR。
性能
miScript SYBR Green PCR Kit配合miScript PCR System的组件,灵敏和特异性的检测和定量miRNA。miScript PCR System灵敏度高、动态范围广。持续高的扩增效率,确保使用∆∆CT方法进行多个miRNAs表达分析结果的准确性(参见下图)。其卓越的性能使得初次尝试时即可获得高度重复性结果。
miRNA expression in colorectal cancer.
从人结肠腺癌总RNA和正常邻近结肠总RNA制备cDNA。使用人miRNome miScript miRNA PCR阵列进行miRNomes分析。腺癌组织中有56个miRNA强下调,50个强上调(红线表示±4倍变化)。
原理
miScript PCR System配合SYBR Green-based real-time PCR,灵敏和特异性的定量和分析miRNA。miScript PCR System可以完成从RNA中合成cDNA和后续的real-time PCR检测miRNAs涉及的所有步骤。
miScript PCR System包含以下组分:
miScript SYBR Green PCR Kit包含QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix和miScript Universal Primer,该引物对在逆转录反应中加入到cDNA的5'端的通用标签序列有特异性。单次cDNA合成反应足够用于许多miRNAs。使用miScript HiSpec Buffer制备的cDNA,配合miScript miRNA PCR Arrays或miScript Primer Assays可用于定量成熟miRNA。使用miScript HiFlex Buffer制备的cDNA配合real-time PCR步骤中合适的引物:用于miRNA或其它非编码RNA的miScript Primer Assays、用于miRNA前体的miScript Precursor Assays或用于mRNA的QuantiTect Primer Assays,可用于检测不同种类的RNA。
操作流程
使用the miScript II RT Kit进行逆转录反应,得到的cDNA作为模板,配合miScript SYBR Green PCR Kit和合适的miScript Primer Assays和miScript miRNA PCR Arrays进行real-time PCR。使得miRNA定量和分析简单可行,实验室的real-time PCR循环仪上均可进行。
应用
miScript SYBR Green PCR Kit作为miScript PCR System的一部分,用于:
· 成熟miRNA的定量检测和谱分析
· 同时检测miRNA和mRNA
· 同时检测miRNA和miRNA前体
· 检测snoRNA和其他非编码RNA
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