描述
用于从血清或血浆中分离外泌体和其他细胞外囊泡;包括10毫升沉淀缓冲液A、10毫升再悬浮缓冲液、200 U凝血酶和500µl凝血酶缓冲液。
产品特点
· 出色恢复外泌体和其他细胞外囊泡
· 简单明了的协议,耗时不到2小时
· 无需超速离心或苯酚/氯仿步骤
· 与miRCURY LNA miRNA PCR系统完全兼容
· 适用于各种应用
产品详情
miRCURY外泌体试剂盒通过不需要特殊实验室设备的简单协议实现高质量和可扩展的外泌体外泌体分离。miRCURY Exosome血清/血浆试剂盒针对血清和血浆样品进行了优化,而miRCURY Exosome Cell/Urien/CSF Kit则设计用于处理细胞条件培养基、尿液和CSF样品。这两种试剂盒都提供了高的外体回收率,并与不同的下游分析无缝整合。
性能
从血清和血浆中高效分离外泌体
miRCURY Exosome血清/血浆试剂盒针对从血清和血浆样品中分离exosomes进行了优化。该试剂盒包括凝血酶,用于从血浆中有效分离外泌体。为了评估外泌体分离的效率,我们量化了颗粒中发现的外泌体外泌体与通常丢弃的上清液的比例(见数据图表:Exosome recovery from serum)。我们观察到细胞外小泡的富集率非常高。
从细胞条件培养基、尿液和脑脊液中高效分离外泌体
miRCURY Exosome细胞/尿液/脑脊液试剂盒优化用于从细胞条件培养基、尿液和脑脊液样品中分离外泌体。在比较这些样品类型的颗粒与上清液中的外泌体分数的研究中,我们观察到非常高的外泌体富集率(见数据图表:Exosome recovery from cell-conditioned media and Exosome recovery from urine)。
通常,健康个体尿液和脑脊液样本中存在的miRNA数量非常有限。因此,我们强烈建议在RNA分离和PCR分析之前对这些生物流体进行外泌体分离。这允许您使用外泌体分离试剂盒作为浓缩样品的一种方法,同时将潜在PCR抑制剂的数量保持在最低限度(见数据图表:Detect more miRNAs in biofluids using exosome isolation kits)。
原理
miRCURY Exosome试剂盒利用沉淀富集exosomes和其他细胞外囊泡。它们经过优化,可从各种生物流体样品(如细胞条件培养基、尿液、脑脊液、血清或血浆)中有效分离外泌体。这些协议易于使用,只需两个小时。
尽管它们不是物种特异性的,但试剂盒协议针对人类生物流体进行了优化。有关不同样品类型的推荐起始材料,请参阅miRCURY Exosome Kits说明书。
为什么要研究外泌体?
外泌体是细胞衍生的膜状颗粒,大小在20-120纳米之间,与病毒大小大致相同,但比微囊泡小得多(见图:The structure of an exosome)。外泌体从细胞排出到周围的介质中,可以在许多(如果不是全部)体液中发现。它们作为细胞间激素样信使的作用,加上作为蛋白质和RNA载体的稳定性,使其成为多种疾病和生物过程的理想生物标志物(见图:The hypothesis of exosomal shuttling of miRNAs)。
外泌体由大多数细胞类型分泌,由多泡体与质膜融合形成。他们被认为参与了许多功能,包括:
· 免疫调节(例如,肿瘤衍生的外泌体可帮助肿瘤逃避免疫反应)
· 血液凝固
· 细胞迁移
· 细胞分化
· 小区间通信
比外泌体(高达1µm)大的微囊泡通常通过质膜的囊泡形成,而外泌体内的多泡体通过囊泡释放。
步骤
将样品离心以除去细胞和碎片,以及先前冷冻样品的冷沉淀。加入沉淀缓冲液,样品在室温下孵育1小时。在30分钟离心步骤期间将外泌体粒化。再悬浮后,外泌体可用于下游分析。
应用
miRCURY外泌体试剂盒主要用于miRNA/RNA分析应用。
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