特点

•     · 可处理大体积样本，可灵敏检测低丰度转录本
•     · 1小时内即可完成囊泡RNA的分离
•     · 采用离心柱纯化流程，能够平行处理多个样本
•     · 可从血清或血浆中分离miRNA和mRNA

产品详情

exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit采用亲和性膜离心柱，可从exosomes和来自血清或血浆中的其他细胞外微泡中高效分离RNA。Maxi规格的分离柱可处理多达4 ml的大体积样本，因此能够可靠检测低丰度RNA。该试剂盒能够快速、便利的获得结果，十分适用于敏感的下游应用。

性能

exoRNeasy纯化exosomes和其他细胞外微泡与超速离心法相比，不仅速度更快，并且产物纯度更高。扫描电镜显示，虽然这两种纯化技术都能够纯化预期大小的完整的囊泡，但超速离心法的产物还含有很多不符合预期的更小、或其他形状的细胞结构（参见Intact vesicles are eluted from the exoEasy membrane with higher purity compared with ultracentrifugation）。
 
此外，Bioanalyzer分析显示，exoRNeasy和传统超速离心方法分离得到的大RNA和小RNA长度和产量相似（参见exoRNeasy isolates small and large RNAs from extracellular vesicles in plasma）。

通过RT-qPCR实验对exoRNeasy纯化的RNA产物和exoEasy分离柱流出液进行分析，结果显示，exoRNeasy的产物包括血浆中所有mRNA，包括细胞外囊泡的miRNA，且不含细胞（参见exoRNeasy captures all mRNA and vesicle-specific miRNAs in plasma）。

原理

exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit改进了传统的超速离心微泡分离方法，能够在20分钟内快速纯化得到细胞外囊泡。该试剂盒采用Exosome Diagnostics, Inc.公司的技术，通过离心柱和特制缓冲液，从多达4 ml的预过滤血浆中分离exosomes。之后使用QIAGEN miRNeasy技术分离总RNA。整个实验流程，从血清/血浆样本到RNA产物，只需1小时。

步骤

从细胞外微泡分离RNA的完整实验包括两步：纯化exosomes和分离RNA（参见The exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit workflow — sample to microvesicles to total RNA in just 1 hour）。

在exosomes纯化步骤，预过滤的血浆（不包含大于0.8 μM的微粒）与Buffer XBP混合，加至exoEasay亲和性膜离心柱上，结合到柱上。使用Buffer XWP洗涤结合在膜上的囊泡，之后使用QIAzol裂解。

在RNA分离步骤，在QIAzol洗脱液中加入氯仿，回收水相，将其与乙醇混合。包括miRNA在内的总RNA结合到离心柱上，洗涤三次后洗脱。

应用

exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit高度适用于从血浆或血清样本中的囊泡重分离包括mRNA和miRNA的总RNA。