特点

•     · 优化的实验方案，用于富含纤维的组织
•     · 总RNA产量高
•     · 获得高品质RNA，用于多种下游应用
•     · 使用DNase I去除基因组DNA

产品详情

RNeasy Fibrous Tissue Mini Kit包含蛋白酶K和RNeasy离心柱，前者用于去除富含纤维的组织样本中大量的蛋白，后者用于纯化至多100 µg高品质RNA。该试剂盒可在QIAcube全自动核酸纯化仪上实现完全自动化。可使用RNAlater RNA Stabilization Reagent或Allprotect Tissue Reagent方便的稳定纤维组织样本，使用TissueRuptor或TissueLyser体系有效地裂解样本。处理更大的样本可使用RNeasy Fibrous Tissue Midi Kit（离心柱的结合能力为1 mg RNA）。

性能

RNeasy Fibrous Tissue Kits适用于从纤维丰富组织中提取RNA，RNeasy Fibrous Tissue操作流程能简单有效的提取高品质总RNA（参见" High-quality RNA from fiber-rich tissues"），纯化的RNA适用于多种下游应用，包括芯片分析和real-time RT-PCR （参见 " Real-time gene expression analysis in a variety of fibrous tissues" 和" LightCycler analysis of high-quality RNA from heart"）。与其他硅胶方法相比，RNeasy Fibrous Tissue Mini Kit从纤维丰富组织中提取的RNA产量更高（参见下表）。

* 根据试剂盒供应商的说明书从组织中纯化的RNA。† 离心柱被阻塞，产生低品质RNA。制备样本中的污染 物可能导致产量被高估。

原理

RNeasy技术具有异硫氰酸胍裂解的严谨性以及硅胶膜纯化的速度和纯度，简化了总RNA的纯化流程。RNeasy Fibrous Tissue Kits适用于处理纤维丰富的组织，例如骨骼肌、心脏和主动脉。因为含有大量的收缩性蛋白、连接组织和胶原蛋白，这些组织非常难裂解。RNeasy Fibrous Tissue操作流程将蛋白酶K和RNase-free DNase消化步骤结合起来，在RNA分离的同时能降解蛋白和基因组DNA，纯化得到的高品质总RNA的产量更高。RNeasy技术适用于大于200 nt的RNA，因此RNA产物不包括5S rRNA、tRNA或其他小分子量RNAs，产物占细胞内总RNA的15–20%。

步骤

0.5–30 mg纤维组织样本在异硫氰酸胍缓冲液中裂解。裂解液被稀释后，样本经蛋白酶K处理。离心使碎片沉淀。然后加入乙醇使裂解液澄清，之后RNA结合到RNeasy硅胶膜上。在RNeasy离心柱中加入DNase去除残留的DNA。DNase和其他污染物被洗涤后，使用150–500 µl不含RNase的水即可洗脱得到至多100 µg的高品质总RNA（参见" RNeasy Fibrous Tissue Midi procedure"）。

应用

RNeasy Fibrous Tissue Kits从纤维丰富的样本中纯化得到的高品质总RNA，适用于多种下游应用，包括芯片分析和real-time RT-PCR。

参数