产品简介

Coolaber血液RNA快速提取试剂盒适用于从动物血液样品中快速提取总RNA。纯化好的总RNA可用于mRNA分离，RT-PCR，Northern杂交等下游分子实验。抗凝剂的使用，不影响RNA的提取。

操作步骤

（样品裂解，样品纯化，RNA收集）

离心条件均优先选择4℃，室温离心也可以。

一、样品裂解

1. 12,000 rmp 室温离心3 min 收集 0.2-1.5 mL 抗凝全血的细胞沉淀。

2. 在血细胞沉淀中，加入1mL 的裂解液，用枪头充分吹打混匀。

注意：如离心后细胞沉淀的量目测大于200uL ，建议只留取200uL 沉淀做裂解，否则会影响裂解效果。

二、样品纯化

1. 在上述裂解液中加入0.3 mL 的RNA纯化液，剧烈震荡 30 s。

2. 再加入0.2 mL 的氯仿，剧烈震荡 30 s。

3. 12,000rpm 离心 3-5min，取上清到新的2mL的离心管中（避免触及分层界面，下层会有大量DNA和蛋白污染，避免污染。）

4. 上清中加入等体积的RNA结合液，颠倒混匀，分多次加入同一个RNA纯化柱中（如有絮状物或沉淀产生，一并加入纯化柱中）。12,000rpm 离心 1min，弃穿透液。

在纯化柱中加入0.5mL RNA洗涤液，室温12,000rpm离心半分钟，弃穿透液。重复洗涤一次。（洗涤液使用后拧紧瓶盖，防止挥发）

三、RNA收集

1. 将结合有RNA的纯化柱12,000rpm 离心 1min，甩干乙醇。（乙醇的残留将会降低洗脱效果和影响下游实验，或者适当延长离心时间，将有助于乙醇的去除）

2. 弃收集管，将柱芯转移到1.5mL的RNase-free离心管中（自备），加入30-50uLRNA溶解液，室温放置 1分钟，12,000 rpm离心1分钟洗脱RNA。得到的RNA可直接用于后续实验或者 -80℃ 存放。

3. 如果要提高 RNA 产量，加入30-50uLRNA溶解液重复洗脱一次，合并两次穿透液；如果要提高 RNA 浓度，使用第一次的洗脱液 加回到吸附柱中重复洗脱。

注意：建议RNA用于下游实验之前，先进行质量检测。经变性琼脂糖凝胶电泳后，会有清晰的28S和18S条带，以及中间弥散的mRNA条带，其中28S条带是18S条带亮度的1.5-2倍。有时还包括跑在最前面的较暗的5S条带。如果条带不清晰或者弥散，可能是提取过程中或者材料保存过程中RNA发生了降解。小于200bp的RNA分子不能有效结合到吸附柱上。A260/A280 比值1.8~2.0对应RNA纯度90-100%之间。