产品简介

本试剂盒采用SYBR® Green I 嵌合荧光法的原理进行miRNA荧光定量检测。本试剂盒包含miRNA荧光定量检测的所有试剂，包括2×miRcute Plus miRNA Premix、50×ROX Reference Dye 和Reverse Primer。其中2×miRcute Plus miRNA Premix (SYBR&ROX) 是专门为miRNA 定量检测而研发的新一代预混形式的荧光定量PCR 检测试剂，其中的DNA Polymerase 采用化学修饰的热启动聚合酶，配合特殊的Buffer体系，使反应特异性更好，灵敏度更高，并能在更广的范围内进行准确定量。

产品特点

■ 灵敏度高：可在pg 级的总RNA 中检测到目的miRNA。

■ 特异性强：体系全新升级，更好的区分单碱基的差异，完美区分家族中的不同miRNA。

■ 通用性好：适用于各种类型的荧光定量PCR 仪。

下游应用

对miRNA 反转录后的cDNA进行荧光定量PCR检测

注意事项

本试剂盒须与miRcute plus miRNA cDNA第一链合成试剂盒(KR211) 配套使用。

实验结果

表1. 人类let-7 家族的所有3p miRNA 共有10 条，彼此之间相差的碱基很少，甚至只有单碱基的差异。以这10 条miRNA mimics 为模板，以不同引物，使用TIANGEN miRcute 增强型 miRNA 荧光定量检测试剂盒（SYBR Green）（FP411）分别扩增这10 条miRNA。结果显示，特异引物只会扩增特异模板，非特异识别率低于5%，表明TIANGEN FP411 具有良好的特异性，能够区分单碱基差异的miRNA。

图1. 使用TIANGEN miRcute 增强型 miRNA 荧光定量检测试剂盒（SYBR Green）（FP411）分别与国外知名Q 公司、E 公司和国内T 公司的同类产品定量hsa-miR-15a-5p，展示扩增曲线、熔解曲线和标准曲线。结果显示，对于同一cDNA 样本，与竞品相比TIANGEN FP411 具有更高的特异性、灵敏度和线性范围，定量更加准确。
Human 293T 细胞Total RNA 提取采用TRNzol Universal (DP424)，取1 μg 进行反转录。反转录使用TIANGEN miRcute 增强型miRNA cDNA 第一链合成试剂盒（KR211），体系20 μl。反转录之后分别将cDNA 稀释10-105 倍，各取2 μl 定量。使用仪器为ABI 7500 Fast。