产品简介

Coolaber软骨组织RNA提取试剂盒用于从各种软骨组织样品中快速提取总 RNA 的试剂盒，它能有效克服传统 TRIzol 方法提取软骨组织 RNA 时，十分容易产生糖蛋白和酸性多糖污染这一缺点。

操作步骤

（样品裂解，样品纯化，RNA收集）

离心条件均优先选择4℃，室温离心也可以。

一、样品裂解

1. 液氮研磨法

将 50-200 mg 新鲜或冷冻的软骨组织液氮研磨成粉，加入1mL裂解液重悬后，将裂解物加入1.5mL离心管中，震荡混匀1min。

注意：低温可能导致裂解液有白色悬浮物，请置于65℃水浴充分溶解后使用。裂解液含巯基乙醇，请于通风橱内操作。

二、样品纯化

1.  在裂解物中加入0.3 mL 的RNA纯化液 和 0.2 mL 自备氯仿，在震荡器上震荡 30 s，溶液呈均匀的乳浊状。

2.  12,000rpm 离心 3-5min，取上清到新的1.5mL离心管中（避免触及分层界面，下层会有大量DNA和蛋白污染，避免污染。）

3.  上清中加入等体积的RNA结合液，颠倒混匀，分两次加入同一个RNA纯化柱中（如有絮状物或沉淀产生，一并加入纯化柱中）。12,000rpm 离心 1min，弃穿透液。

4.  在纯化柱中加入0.5mL RNA洗涤液，室温12,000rpm离心半分钟，弃穿透液。重复洗涤一次。（洗涤液使用后拧紧瓶盖，防止挥发）。

三、RNA收集

1. 将结合有RNA的纯化柱12,000rpm 离心 1min，甩干乙醇。（乙醇的残留将会降低洗脱效果和影响下游实验，或者适当延长离心时间，将有助于乙醇的去除）

2. 弃收集管，将柱芯转移到1.5mL的RNase-free离心管中（自备），加入30-50uLRNA溶解液，室温放置 1分钟，12,000 rpm离心1分钟洗脱RNA。得到的RNA可直接用于后续实验或者 -80℃ 存放。

3. 如果要提高 RNA 产量，加入30-50uLRNA溶解液重复洗脱一次，合并两次穿透液；如果要提高 RNA 浓度，使用第一次的洗脱液 加回到吸附柱中重复洗脱。

注意：建议RNA用于下游实验之前，先进行质量检测。经变性琼脂糖凝胶电泳后，会有清晰的28S和18S条带，以及中间弥散的mRNA条带，其中28S条带是18S条带亮度的1.5-2倍。有时还包括跑在最前面的较暗的5S条带。如果条带不清晰或者弥散，可能是提取过程中或者材料保存过程中RNA发生了降解。小于200bp的RNA分子不能有效结合到吸附柱上。A260/A280 比值1.8~2.0对应RNA纯度90-100%之间。