RNeasy Lipid Tissue Mini Kit包含QIAzol Lysis Reagent和RNeasy离心柱,前者用于裂解脂肪和其他类型组织样本,后者用于纯化至多100 µg高品质RNA。该试剂盒可在QIAcube全自动核酸纯化仪上全自动化完成。使用RNAlater RNA Stabilization Reagent(仅适用非脂肪组织)或Allprotect Tissue Reagent可方便的稳定组织样本,使用TissueRuptor或TissueLyser体系可有效地破碎样本。处理更大的样本可使用RNeasy Lipid Tissue Midi Kit(离心柱的结合能力为1 mg RNA)。
RNeasy Lipid Tissue操作流程将QIAzol裂解方法与RNeasy RNA分离方法结合,能从富含脂肪的组织中得到高产量总RNA,10 mg脑组织RNA的平均产量为10 µg、10 mg动物脂肪组织RNA的平均产量为2.4 µg。RNeasy Lipid Tissue Kits可有效的纯化高品质总RNA,无苯酚残留(参见"High-quality RNA" 和 "High yields of RNA without phenol carryover")。从从脂肪组织得到的RNA适用于包括real-time RT-PCR(参见"Real-time analysis" )等下游应用。
RNeasy Lipid Tissue Kits适用于富含脂肪的组织,如脑和脂肪组织。方便RNeasy Lipid Tissue实验方案结合了优化的苯酚/胍的裂解方法以及经验证的RNeasy硅胶膜纯化方法,能纯化得到高品质的总RNA。QIAzol Lysis Reagent结合了有机提取与离液破碎的方法,具有很高的裂解效率。RNeasy技术适用于大于200 nt RNA,因此RNA产物不包括5S rRNA、tRNA或其他小分子量RNAs,产物占细胞内总RNA的15–20%。
10–100 mg组织样本在QIAzol Lysis Reagent中均质化。加入氯仿,匀浆离心后分为水相和有机相。吸取上层水相后加入乙醇以提供合适的结合条件。然后将样品加入RNeasy离心柱,至多100 µg的总RNA与硅胶膜结合,苯酚和其他污染物被高效洗去。使用30–100 µl不含RNase的纯水即可洗脱得到高品质RNA(参见"RNeasy Lipid Tissue Mini procedure”)。
RNeasy Lipid Tissue Kits可简单有效的纯化高品质RNA,得到的RNA适用于多种下游应用,包括芯片分析和real-time RT-PCR。
| Features | Specifications |
| Applications | PCR, real-time PCR, microarray |
| Sample amount | 10–100 mg |
| Yield | 2.4–10 mg |
| Technology | Silica technology |
| Processing | Manual |
| Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein | RNA |
| Elution volume | 30–100 µl |
| Main sample type | Fatty tissue samples |
| Time per run or per prep | 45 minutes |
| Format | Spin column |
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